|
|
Anizotropní techniky ve studiu cytoplazmy
Sýkorová, Kateřina ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Mravec, Filip (vedoucí práce)
Cílem této práce bylo provést srovnávací experimenty pomocí časově rozlišené anizotropie a ustálené anizotropie v bakteriích kmene Cupriavidus necator. Fluorescenční sondou pro skenování buněčného vzorku byl vybrán fluorescein, respektive jeho derivát BCECF_AM. Pomocí ověřovacího experimentu v systému glycerol/voda s přídavkem fluoresceinu, byla ověřena anizotropie a vypočítán molární hydrodynamický objem jedné molekuly fluoresceinu, který přibližně odpovídal jeho reálné hodnotě. Pomocí fluorescenční anizotropní mikroskopie byly získány obrázky bakterií s příslušnými středními hodnotami anizotropií. Skeny bakterií CN H16 a mutantů CN PHB-4, ukázaly patrné rozdíly mezi uniformitou vnitřního prostředí.
|
|
|
Programově řízená lyofilizace k přípravě nosičového systému nativního hyaluronanu a hydrofobních molekul
Waczulíková, Kristína ; Sedláček, Petr (oponent) ; Enev, Vojtěch (vedoucí práce)
Amfifilný charakter biopolyméru hyalurónanu napomáha interakciám medzi jeho hydrofóbnymi časťami reťazca a hydrofóbnymi ligandmi, čo ho radí medzi zlúčeniny vhodné ako nosiče pre dopravu liečiv. Cieľom tejto diplomovej práce bolo preto pripraviť pomocou programovo riadeného sušenia mrazom systém na báze natívneho hyalurónanu, ktorý by bol schopný transportovať hydrofóbne liečivá. Pre simuláciu hydrofóbnych interakcií medzi liečivom a hyalurónanom boli ako modelové zlúčeniny použité fluorescenčné sondy perylén, pyrén, prodan a 1,6-difenyl-1,3,5-hexatrién. Účinnosť sušenia mrazom bola študovaná pomocou infračervenej spektrometrie a skenovacieho elektrónového mikroskopu. ATR-FTIR spektrometria potvrdila pre modelové zlúčeniny (okrem pyrénu) hydrofóbne interakcie medzi molekulami sondy a hyalurónanu na základe prítomnosti absorpčného pásu valenčnej vibrácie C=C väzby v aromatických kruhoch sond. Z IČ spektier nebolo možné s určitosťou potvrdiť prítomnosť zvyškového terc-butylalkoholu vo vzorkách. SEM fotografie odhalili, že zvyšovanie tlaku v procese sušenia v druhej sérii vzoriek malo pozitívny vplyv na kvalitu lyofilizovanej vzorky. Interakcie jednotlivých fluorescenčných sond s hyalurónanom boli študované pomocou ustálenej a časovo rozlíšenej fluorescenčnej spektrometrie. Týmito metódami boli získané pozitívne výsledky, ktoré svedčia o prítomnosti interakcie fluorescenčných sond s hydrofóbnymi oblasťami reťazcov hyalurónanu. Výsledky tejto práce môžu prispieť k vývoju nosičových systémov v oblasti cielenej distribúcie liečiv.
|
|
|
Aggregation Behaviour of Polysaccharides in Aqueous Solutions
Mravec, Filip ; Valko, Marián (oponent) ; Hrdlovič, Pavol (oponent) ; Valko, Marián (oponent) ; Pekař, Miloslav (vedoucí práce)
his thesis is focused on aggregation properties of native and hydrophobized hyaluronan, in different molecular weights and degree of substitution, in aqueous solutions. These samples were studied using six different fluorescence probes (Pyrene; Nile red; Perylene; Acridine orange; 6-(p-Toluidino)-2-naphthalenesulfonic acid; PRODAN) and results were compared with simple anionic surfactant (Sodium dodecyl sulfate). All used probes were tested for their spectral properties in dependence on polarity and/or concentration. Two of them (Pyrene, Nile red) were selected to determine apolar core properties of novel hydrophobicaly modified hyaluronan. Domains were tested for polarity and viscosity and dependencies of these two parameters on ionic strength and temperature. For modified hyaluronans were found that critical aggregation concentration decreasing with increasing degree of substitution and molecular weight. Domain qualities show their compactness increasing with increasing ionic strength and decreasing with increasing temperature.
|
|
|
Vliv lyofilizačních podmínek na hydrofobní interakce mezi nativním hyaluronanem a fluorescenční sondou
Říha, Karel ; Venerová, Tereza (oponent) ; Enev, Vojtěch (vedoucí práce)
Biopolymer nativní hyaluronan disponuje amfifilním charakterem své molekuly. Což znamená, že v sobě obsahuje část hydrofilní i hydrofobní. Tento charakter molekuly napomáhá interakcím mezi hydrofobními ligandy a hydrofobními části řetězce, což z hyaluronanu činí jednu ze sloučenin, které jsou potenciálně vhodné jako nosičové systémy léčiv. Cílem této bakalářské práce bylo připravit nosičový systém na bázi hyaluronanu a modelové hydrofobní sloučeniny (fluorescenční sondy). Námi použitou fluorescenční sondou byl pyren. Dále byla práce zaměřena na studium lyofilizačních podmínek, které by vedly k faktickému ovlivnění hydrofobních interakcí mezi námi použitými látkami. Hlavními technikami, které nám posloužily k ověření efektivity lyofilizace (a to ve smyslu podpoření vzniku hydrofobního efektu mezi jednotlivými řetězci hyaluronanu), byly: termogravimetrická analýza, fluorescenční spektrometrie, a v neposlední řadě infračervená spektroskopie s Fourierovou transformací.
|
|
|
Programově řízená lyofilizace k přípravě nosičového systému nativního hyaluronanu a hydrofobních molekul
Waczulíková, Kristína ; Sedláček, Petr (oponent) ; Enev, Vojtěch (vedoucí práce)
Amfifilný charakter biopolyméru hyalurónanu napomáha interakciám medzi jeho hydrofóbnymi časťami reťazca a hydrofóbnymi ligandmi, čo ho radí medzi zlúčeniny vhodné ako nosiče pre dopravu liečiv. Cieľom tejto diplomovej práce bolo preto pripraviť pomocou programovo riadeného sušenia mrazom systém na báze natívneho hyalurónanu, ktorý by bol schopný transportovať hydrofóbne liečivá. Pre simuláciu hydrofóbnych interakcií medzi liečivom a hyalurónanom boli ako modelové zlúčeniny použité fluorescenčné sondy perylén, pyrén, prodan a 1,6-difenyl-1,3,5-hexatrién. Účinnosť sušenia mrazom bola študovaná pomocou infračervenej spektrometrie a skenovacieho elektrónového mikroskopu. ATR-FTIR spektrometria potvrdila pre modelové zlúčeniny (okrem pyrénu) hydrofóbne interakcie medzi molekulami sondy a hyalurónanu na základe prítomnosti absorpčného pásu valenčnej vibrácie C=C väzby v aromatických kruhoch sond. Z IČ spektier nebolo možné s určitosťou potvrdiť prítomnosť zvyškového terc-butylalkoholu vo vzorkách. SEM fotografie odhalili, že zvyšovanie tlaku v procese sušenia v druhej sérii vzoriek malo pozitívny vplyv na kvalitu lyofilizovanej vzorky. Interakcie jednotlivých fluorescenčných sond s hyalurónanom boli študované pomocou ustálenej a časovo rozlíšenej fluorescenčnej spektrometrie. Týmito metódami boli získané pozitívne výsledky, ktoré svedčia o prítomnosti interakcie fluorescenčných sond s hydrofóbnymi oblasťami reťazcov hyalurónanu. Výsledky tejto práce môžu prispieť k vývoju nosičových systémov v oblasti cielenej distribúcie liečiv.
|
|
|
Charakterizace nově vyvinutých fluorescenčních sond v buněčných systémech
Kadlecová, Julie ; Hubálek Kalbáčová, Marie (vedoucí práce) ; Hendrych, Tomáš (oponent)
Nanočástice (NP) představují v současné době progresivní oblast vědeckého výzkumu. Možnost syntetizovat je podle požadovaných parametrů otevírá možnosti pro jejich široké využití i v biomedicíně. Jedním z příkladů jsou nanočástice schopné detekovat buněčné děje, například pH. Již víme, že pH zdravé a rakovinné buňky se liší opačným gradientem na intracelulární a extracelulární straně membrány. V tomto kontextu se tato práce zabývá studiem fluorescenčních křemíkových nanočástic (SiNP) testovaných na buněčné linii lidských keratinocytů ze zdravého dárce (HaCaT) a z dárce s rakovinou kůže (A431). Po zjištění, že ani nejvyšší použité koncentrace SiNP nepůsobí cytotoxicky, mohly být dále studovány pomocí fluorescenční, konfokální a super-rezoluční mikroskopií. Aby bylo možné posoudit pH detekční vlastnosti těchto SiNP, byla zavedena metoda na měření intracelulárního pH fluorescenční raciometrickou sondou SNARF-1 pomocí fluorescenční spektroskopie a průtokové cytometrie. Jelikož jsou hodnoty pH intracelulárního prostředí úzce spjaty s buněčným metabolismem, byl taktéž charakterizován a porovnán metabolismus buněk linie A431 a HaCaT. K tomu byly využity metody pro měření spotřeby analogu glukózy (2-NBDG) a poměrně nová metoda na měření metabolismu v reálném čase SeaHorse. Rozdíly pozorované mezi buněčnou...
|
|
|
Anizotropní techniky ve studiu cytoplazmy
Sýkorová, Kateřina ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Mravec, Filip (vedoucí práce)
Cílem této práce bylo provést srovnávací experimenty pomocí časově rozlišené anizotropie a ustálené anizotropie v bakteriích kmene Cupriavidus necator. Fluorescenční sondou pro skenování buněčného vzorku byl vybrán fluorescein, respektive jeho derivát BCECF_AM. Pomocí ověřovacího experimentu v systému glycerol/voda s přídavkem fluoresceinu, byla ověřena anizotropie a vypočítán molární hydrodynamický objem jedné molekuly fluoresceinu, který přibližně odpovídal jeho reálné hodnotě. Pomocí fluorescenční anizotropní mikroskopie byly získány obrázky bakterií s příslušnými středními hodnotami anizotropií. Skeny bakterií CN H16 a mutantů CN PHB-4, ukázaly patrné rozdíly mezi uniformitou vnitřního prostředí.
|
|
|
Aggregation Behaviour of Polysaccharides in Aqueous Solutions
Mravec, Filip ; Valko, Marián (oponent) ; Hrdlovič, Pavol (oponent) ; Valko, Marián (oponent) ; Pekař, Miloslav (vedoucí práce)
his thesis is focused on aggregation properties of native and hydrophobized hyaluronan, in different molecular weights and degree of substitution, in aqueous solutions. These samples were studied using six different fluorescence probes (Pyrene; Nile red; Perylene; Acridine orange; 6-(p-Toluidino)-2-naphthalenesulfonic acid; PRODAN) and results were compared with simple anionic surfactant (Sodium dodecyl sulfate). All used probes were tested for their spectral properties in dependence on polarity and/or concentration. Two of them (Pyrene, Nile red) were selected to determine apolar core properties of novel hydrophobicaly modified hyaluronan. Domains were tested for polarity and viscosity and dependencies of these two parameters on ionic strength and temperature. For modified hyaluronans were found that critical aggregation concentration decreasing with increasing degree of substitution and molecular weight. Domain qualities show their compactness increasing with increasing ionic strength and decreasing with increasing temperature.
|
|
|
Photoluminiscent diamond nanoparticles - new diagnostic and visualization probes
Cígler, Petr
Selected problems connected with surface modification of nanosized diamond crystals, attachment of chemical sensing architectures to them and their colloidal stability were addressed. Fluorescent nanodiamonds modified by proper functional structures were shown as unique unbleachable nanoprobes for construction of future sensors useful in biological and medicinal applications.
|
host ::
RSS.